Microsvit

Життя у мікроскопі …

Гістохімічні методи дослідження

травня 27, 2013

Гістохімічні методи дослідження дають можливість визначити певні речовини (білки, нуклеїнові кислоти, жири, вуглеводи та мінеральні речовини), їх локалізацію в органах, тканинах, їх кількість. Для виявлення певного класу речовин проводять попередні реакції. Так, для ідентифікації білків використовують реакцію з динітрофторбензолом; вуглеводів – ШИК-реакція; нуклеїнових кислот – фарбування метиловим зеленим-піроніном; ліпідів – фарбування суданом чорним. У разі позитивних реакцій проводять специфічні методи для уточнення хімічного складу.

Відкладення нейтрального жиру помаранчевого кольоруВиявлення нейтральних жирів суданом ІІІ. Для проведення фарбування матеріал ущільнюють желатином та готують зрізи на заморожувальному мікротомі. Зрізи переносять в етанол, після фарбують суданом ІІІ. Після фарби зрізи знову переносять до етанолу , промивають та дофарбовують гематоксиліном Караці. Перед заведенням зріза у гліцериновий гель його знову промивають. При мікроскопічному дослідженні гістопрепарату пофарбованого суданом ІІІ знаходять відкладення нейтрального жиру помаранчевого кольору та жовті фосфоліпіди.

ШИК-реакціяВиявлення глюкопротеїдів за допомогою ШИК-реакції. Депарафіновані зрізи окисляють у водному розчині йодної кислоти, промивають та переносять у реактив Шиффа. Після фарбування зрізи промивають, зневоднюють, просвітлюють та заводять у бальзам. При мікроскопічному дослідженні гістопрепарату пофарбованого реактивом Шиффа знаходять мукоїдні речовини, що містять гексозу червоно-бузкового кольору та інтенсивно забарвлені у червоний колір гранули глікогену.

Пігменти, що містять залізо блакитного кольоруПігменти, що містять залізо блакитного кольору, ядра червоніВиявлення заліза за Перлсом. Зрізи поміщають у суміш жовтої кров’яної солі і хлористоводневої кислоти. Промивають. Дофарбовують в галуновому карміні Гренахера. Промивають, зневоднюють, просвітлюють, заводять у канадський бальзам. При мікроскопічному дослідженні гістопрепарату пофарбованого за Перлсом  знаходять пігменти, що містять залізо блакитного кольору та червоні ядра.

Виявлення кальцію за Косса. Зрізи промивають та занурюють у розчин срібла нітрату на 20 – 60 хвилин під сонячним світлом. Срібла сульфід у вигляді чорного кольору визначає місце локалізації кальцію.

Виявлення амілоїду. Амілоїд – складна сполука, до складу якої входять білки і полісахариди. Амілоїд утворюється при порушені білкового обміну тканин. Суттю гістохімічного виявлення амілоїду є реакція метахромазії. Метахромазія – властивість тканин набувати інший колір ніж барвник. Для виявлення амілоїду застосовують генціанвіолет, метилвіолет, конгорот. При застосуванні 1% розчину генціанвіолет амілоїд зафарбовується в рожево-червоний колір, тканина в синій.

Ваша електронна адреса не буде опублікованна. Обов’язкові поля позначені *

*