Схеми виготовлення гістологічних зрізів

Схема виготовлення парафінових зрізів, яку мені розповів мій вчитель:

• Фіксація. Матеріал знаходиться у нейтральному формаліні в темному місці при кімнатній температурі будь-як довго, але не менше доби.
• Промивка. Матеріал відправляли у склянку, в кришці якої зроблені багато малих отворів и один великий. Через великий отвір склянку приєднували до водопроводного крану, через малі отвори зайва вода витікала. Таким чином банка була приєднана до постійно відкритого крану добу.
• Зневоднення. Використовували “батарею банок”, в які наливали етанол у збільшуючій концентрації від 70° до абсолютного. В кожній банці матеріал перебував приблизно по годині.
• Ущільнення проводили за наступною схемою:

1. етанол:ксилол у співвідношені 3:1 – 2 години;
2. етанол:ксилол у співвідношені 1:1 – 2 години;
3. ксилол – 1 година;
4. ксилол:парафін у співвідношені 1:1 при t37°С – 17 годин;
5. парафін І при t50°С – 1 година;
6. парафін ІІ при t50°С – 1 година

• Охолодження. Шматочки матеріалу орієнтували у просторі, охолоджували (залишали на підвіконні на добу) та потіп наклеювали на дерев`яні блоки. Це такі дерев`яні бруски із насічками. Один бік охолоджєеного блока підігрівали на притискали до бруска.

• Мікротомування. Зрізи готували на санному мікротомі, після чого переносили у теплу воду, де вони розгортались, потім наклеювали на предментне скло та сушили на термостолику ще добу.
• Депарафінування. Знову “батарея банок”  за схемою: 

1. ксилол – 2 хвилини;
2. 96° етанол – 2 хвилини;
3. 70° етанол – 2 хвилини;
4. вода

Схема виготовлення парафінових зрізів, яку я взяла з рекомендацій до машини для заливки фірми SHANDON “Citadel 1000” та використовую сьогодні:

• Фіксація. Так само у нейтральному формаліні не менше доби.
• Зневоднення. “Батарея” склянок за схемою:

1. 96° етанол:формалін у співвідношені 1:1 – 90 хвилин;
2. 96° етанол – 1 година;
3. 96° етанол – 1 година;
4. 96° етанол – на ніч.

• Ущільнення матеріалу за схемою:

1. 96° етанол:ксилол у співвідношені 1:1 – 1 година;
2. ксилол – 1 година;
3. ксилол – 1 година;
4. ксилол – 1 година;
5. парафін І – 1 година;
6. парафін ІІ – 90 хвилин.

• Поміщали на пластикові блоки та охолоджували.
• Мікротомування.
• Депарафінування. Спочатку ксилол двіччі по 10 хвилин, потім 96° етанол двіччі по 5 хвилин.